重組肝素酶Ⅰ熱失活動力學(xué)模型的建立與應(yīng)用
發(fā)布時(shí)間：2015-09-07
【作者】 程詠梅； 陳潮梁； 陳敬華； 劉衛(wèi)超； 周斌； 宋志新；
工業(yè)微生物 , Industrial Microbiology,
2014年02期
【機(jī)構(gòu)】 江南大學(xué)藥學(xué)院； 常山生化藥業(yè)(江蘇)有限公司；
【摘要】 對組氨酸標(biāo)簽肝素酶I（His-Hep I,EC 4.2.2.7）的熱失活機(jī)制進(jìn)行了研究。針對短暫低溫處理可以使熱失活His-Hep I酶活部分恢復(fù)及添加二硫蘇糖醇（DTr）使其熱穩(wěn)定性提高的現(xiàn)象,利用熒光探針法研究了失活過程His-Hep I構(gòu)象變化,證明了該酶構(gòu)象存在可逆轉(zhuǎn)變行為。為進(jìn)一步明晰His-Hep I的熱失活機(jī)制,假設(shè)該酶熱失活的主要途徑包括去折疊及形成聚集體,并以此為基礎(chǔ)建立模型進(jìn)行擬合,模型與實(shí)驗(yàn)值吻合良好,表明假設(shè)的合理性。根據(jù)模型計(jì)算的活化能為Er=100.217 kJ/mol、Eir=7.857 kJ/mol和Ed=77.062 kJ/mol,此數(shù)據(jù)從一定程度上解釋了冷處理為何能使His—Hep I部分恢復(fù)活性。進(jìn)一步研究表明,任何能夠抑制這兩種途徑發(fā)生的措施對于提高His-Hep I熱穩(wěn)定性都是有效的。